作者：王西成來源：INTERNET
細(xì)菌內(nèi)毒素是微生物的一種代謝產(chǎn)物，能引起恒溫動(dòng)物和人體體溫異常升高，其中革蘭陰性桿菌所產(chǎn)生的內(nèi)毒素致熱活性最強(qiáng)，很少劑量即能引起廣泛的生物效應(yīng)及病理作用，嚴(yán)重時(shí)甚至危及生命。因此，加強(qiáng)其檢測(cè)便成為輸液制劑、市售輸液藥品、一次性注射器等面臨的重要課題，現(xiàn)將體會(huì)介紹如下。
1 檢測(cè)方法
一般最常用的是家兔發(fā)熱試驗(yàn)法（RT）與鱟試驗(yàn)法（LT）。RT為一種定性檢測(cè)內(nèi)毒素的方法，應(yīng)用歷史悠久，有很多限制，如家兔對(duì)內(nèi)毒素反應(yīng)上有個(gè)體差異，敏感度不高、耗時(shí)、不能定量檢測(cè)等。LT具有快速、簡(jiǎn)便、敏感度高、假陽性少、試劑耗費(fèi)少等優(yōu)良，可廣泛應(yīng)用于注射劑的熱原控制，組液法對(duì)非內(nèi)毒素引起的熱原則不敏感。
2 影響因素
2.1 試劑靈敏度由于鱟試劑靈敏度以能與之產(chǎn)生陽性反應(yīng)的內(nèi)毒素的最低限度表示，靈敏度變化將使測(cè)定結(jié)果所反應(yīng)的樣品中內(nèi)毒素允許限度發(fā)生變化，所以應(yīng)進(jìn)行靈敏度標(biāo)化，特別是更換鱟試劑批號(hào)時(shí)，因?yàn)樵贚T操作過程中，各個(gè)實(shí)驗(yàn)室條件之間必定有差異，標(biāo)化時(shí)，應(yīng)使用同一批號(hào)鱟試劑稀釋液，不宜用滅菌水取代。鱟試劑存放一定時(shí)間后（如半年），靈敏度有可能發(fā)生變化，也應(yīng)進(jìn)行標(biāo)化。文獻(xiàn)中曾有報(bào)道，因鱟試劑靈敏度實(shí)測(cè)值與標(biāo)化值差異過大而引起同批檢測(cè)樣品截然相反的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。鱟試劑超過有效期，須進(jìn)行靈敏度考核，對(duì)于0.5ml/支，如陽性管成立，證明其活性仍可使用，對(duì)于0.1ml/支即使陽性管能成立，也不能使用，因?yàn)樗窃诓煌碴持凶鲗?duì)照。
2.2 干擾試驗(yàn)是杜絕出現(xiàn)假陰性結(jié)果的有效且可行的措施。所有法定的藥物或樣品檢測(cè)均需在未稀釋或適當(dāng)稀釋后測(cè)定，稀釋倍數(shù)不能超過最大有效稀釋后測(cè)定，稀釋倍數(shù)不能超過最大有效稀釋倍數(shù)，否則其中的內(nèi)毒素經(jīng)稀釋后濃度過低而不被鱟試驗(yàn)法檢測(cè)出。若供試品有干擾現(xiàn)象（抑制或增強(qiáng)），經(jīng)處理，仍未達(dá)到試驗(yàn)要求的條件，則應(yīng)服從家兔法，此時(shí)家兔法仍是檢測(cè)其中內(nèi)毒素限量的適宜方法。另外，為提高鱟試驗(yàn)法的準(zhǔn)確性我們認(rèn)為有無干擾物質(zhì)存在，均應(yīng)同時(shí)做干擾試驗(yàn)，以排除環(huán)境、操作、試劑、藥物等方面可能存在干擾鱟凝膠形成的因素，避免出現(xiàn)假結(jié)果，確保實(shí)驗(yàn)可靠性。
2.3 反應(yīng)靈敏度酸堿度是影響鱟試驗(yàn)法反應(yīng)靈敏度的一個(gè)重要因素，筆者根據(jù)多年的工作經(jīng)驗(yàn)，認(rèn)為在進(jìn)行鱟試驗(yàn)法前，預(yù)先測(cè)定一下pH值，然后調(diào)至5.0～6.0為宜，另外，溫度在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中也應(yīng)恒定，否則檢測(cè)的靈敏度將顯著下降，甚至反應(yīng)被抑制，文獻(xiàn)中曾有多次報(bào)道。
2.4 操作加樣結(jié)束，應(yīng)即放入恒溫水浴鍋中，因液態(tài)鱟試劑極不穩(wěn)定，室溫放置時(shí)間過長(zhǎng)會(huì)影響反應(yīng)靈敏度，同時(shí)，供試品在恒溫水浴中應(yīng)避免振動(dòng)，在反應(yīng)尚未完成時(shí)不應(yīng)取出試管，因?yàn)樯形赐耆纬傻哪z被破壞后不能被還原，容易出現(xiàn)假陰性。
3 結(jié)果判斷
鱟試驗(yàn)法由于是以細(xì)菌內(nèi)毒素激活其中凝集因子和凝聚酶，在試管中形成凝膠的一系列生化反應(yīng)替代不了哺乳動(dòng)物自身熱反應(yīng)的整個(gè)生理過程，因此，在中國(guó)藥典2000版中檢測(cè)方法由單一的凝膠法增加了定量檢測(cè)法，所以當(dāng)用鱟試驗(yàn)法測(cè)得結(jié)果為陰性時(shí)，可不再用家兔法作熱原試驗(yàn)，組結(jié)果可疑時(shí)，須按規(guī)定重做一遍或用家兔法來復(fù)檢。
作者單位:235000安徽金蟾藥業(yè)集團(tuán)有限公司