鱟試驗是利用鱟的阿米巴細(xì)胞與微量內(nèi)毒素產(chǎn)生凝集反應(yīng)的現(xiàn)象,判斷樣品中細(xì)菌內(nèi)毒素限量是否符合規(guī)定的一種方法。它具有比家兔法更簡便、快速、靈敏度高、重現(xiàn)性好等優(yōu)點。但是該法受到許多因素的影響,故在做鱟試驗檢查時,應(yīng)注意下列問題。
1 鱟試劑靈敏度
藥典規(guī)定每批鱟試劑在用于試驗前首先核對靈敏度。因為鱟試劑由于生產(chǎn)廠家不同,部分鱟試劑檢測同一檢品時,用相同標(biāo)示值的鱟試劑,出現(xiàn)不同結(jié)果。因而先核對靈敏度可避免因鱟試劑本身造成的判斷失誤。
2 操作條件
2.1 操作熟練程度
操作時應(yīng)該將手用酒精消毒,安瓿開啟前應(yīng)先用砂石劃痕(不管是色點或包環(huán)易折安瓿),用手半拉半掰將頸部折斷,千萬不能用鑷子敲擊,防止碎玻屑掉入安瓿。在鱟試劑的溶解、樣品的稀釋及加入時,取樣均應(yīng)準(zhǔn)確,緩緩加入避免氣泡。雙手避免在安瓿或試管的上方來回移動,加樣后用封口膜迅速封閉管口,并立即放入恒溫水浴箱中,操作要快,否則易致假陽性的出現(xiàn)。
2.2 溫度
溫度對鱟試劑的靈敏度影響很大,隨著溫度的升高以及延長保溫時間,鱟試劑的靈敏度亦增大,增加假陽性。溫度過高會破壞鱟試劑。應(yīng)控制在(37±1)℃之間,保溫(60±2)min。
2.3 試驗用的試管架最好專門定制,眼孔直徑應(yīng)與安瓿或試管直徑相接近,左右晃動。水浴箱要放置不要傾斜,保溫過程中不可隨時取出觀察。防止試管受到振動鱟試劑與細(xì)菌內(nèi)毒素形成的凝膠受到振動后易變形而誤判為陰性。
3 其它
3.1 供試品稀釋
選用更高靈敏度的鱟試劑,則應(yīng)增加樣品的稀釋倍數(shù)。
3.2 所用器皿均應(yīng)徹底洗凈和滅菌安全
實驗用器皿均應(yīng)充分洗滌并沖洗干凈,特別是接觸酸堿或用洗衣粉、洗液等洗滌后,更應(yīng)沖洗干凈,以免殘留物破壞極微量的內(nèi)毒素。